非标样本准备要求—细胞培养上清

对血清和血浆样本，Olink 进行了充分的优化与验证，故不再需要预实验。

除此之外的其他样本类型（非标样本），蛋白质组成及含量参差不同，进行预实验可以确保在最佳条件下分析样本，保障检测指标在有效的动态及线性范围内，以及排除有可能存在的过饱和风险。因此我们强烈建议非标样本都需进行预实验：

Olink 建议的预实验内容包括：

1. 至少选择6-12个样本（即每个组别分别选取3-6个样本）

1. 样本的选择应涵盖新基质的整个范围(例如：病例和对照组，不同的处理条件)。
2. 如果您预期样品间的差异很大(例如，组织培养反应的高可变性、扩展的样品处理条件或样品浓度)，则应增加预实验中分析的样品数量，并应包括额外的样品，以确定方法学中的变异性。这将帮助指导后续实验。

2. 每个样品应至少用3个稀释梯度进行测试（由实验室根据panel指标特性确定操作）

1. 我们的panel开发充分考虑到血浆和血清中的蛋白组成和浓度跨度。应该使用什么稀释度取决于客户感兴趣的靶点蛋白以及浓度，根据验证数据中的分析测量范围进行确认。
2. 我们的支持团队可以根据您对基质中蛋白质浓度的预期和所选择的panel，帮助您选择最合适的稀释度。
3. 如果您正在分析组织培养样本，并怀疑不同样品之间存在高可变性(即细胞分化)， 那么您应该测试重复样本，以确定方法中的可变性。

一旦您对预实验数据满意，则使用最优稀释开展所有样品正式实验。

非标样本—细胞培养上清准备建议

细胞上清准备：

1. 每个细胞培养孔/皿接种相同的初始细胞密度

2. 细胞在细胞培养基中培养稳定后，弃培养基，PBS 洗涤 3 次

3. 转无血清培养基中再培养 24h

4. 收集培养基，1000-2000 x g 离心 10 分钟离心并收集上清

5. 分装≥100ul于Ep管中

6. -80℃保存

注意：

实验样本需包含无细胞的空白培养基

如果任何蛋白质预期是高诱导表达的，实验室会对样品做至少包括两个浓度梯度稀释，以检测任何可能的浓度。